明胶酶谱法分析试剂盒配置溶液时需要注意哪些问题!

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基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, mmp)以无活性的酶原形式分泌,活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白,又称胶原酶。通过影响细胞外基质,胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程,并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的mmp-2、mmp-9参与各种生理与病理过程,其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。
酶谱法的基本过程是先将样品进行sds-聚丙烯酰胺(sds-page,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的mmp-2和mmp-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与mmp-2和mmp-9活性成正比。
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溶液配制方法:
1. 染色液配方:0.25g 考马斯亮蓝r250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸,定容至1000ml,混合1h 后用
whatman 1 号滤纸过滤,于室温可无限期保存;
2. 脱色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(v:v:v);
3. 保存液:7%冰醋酸;
4. 凝胶染色之后,染色液可以回收利用,装入新容器内,室温或4 ºc 保存,可反复使用2-4 次。
相关文献支持:
1. nagase h and woessner jf. matrix metalloproteinases. j biol chem, 1999, 274, 21491-21494
2. heussen c, and dowdle eb. electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. anal. biochem,1980,102,196–202
3.绿茶多酚egcg增强动脉粥样硬化斑块稳定性及其相关机制研究
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