Bend.3；小鼠脑微血管内皮细胞

1、细胞名称：bend.3；小鼠脑微血管内皮细胞
2、生长特性：贴壁 □ 悬浮 □半悬浮半贴壁
3、细胞生长条件：
培养条件    dmem(高糖）+10%fbs+1%双抗
温度    37℃
空气条件     5% co2，,95% air
传代方法   首次建议1:2传代，2~3天换液
冻存条件   90%fbs+10%dmso
4、背景资料：该细胞转染了ntkmt逆转录病毒载体，表达多瘤病毒中t抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收荧光标记的低密度脂蛋白（ldl）证实了该细胞株的内皮细胞特性。细胞因子和脂多糖（lps）可诱导细胞分泌madcam-1和e选择素。tnf-α、il-1和lps的诱导是时间和浓度依赖。早代数的未刺激细胞会分泌madcam-1和vcam-1，但找过30代不分泌。细胞会组成型分泌icam-1，并且表达量会在lps、il-1和tnf-α刺激下增多。p选择素在早代数和晚代数细胞中受tnf-α诱导分泌，但30代后分泌量增加。
二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%co2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用pbs清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%co2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用pbs清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（fbs：dmso=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%co2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

上海雅吉生物科技有限公司

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