hePal-6细胞，小鼠肝癌细胞 传代说明
hepal-6细胞，小鼠肝癌细胞 传代说明 慧颖生物所有细胞产品，血清，培养基，胰酶，双抗年中大促，更多好礼相送！
组成：组份
数目
细胞
1 t-25瓶
细胞说明书
一份
细胞简介：生长特性：
贴壁生长，贴壁性不牢
培养条件：
培养基：90%1640 +10%fbs（推荐hakata优等胎牛血清 货号：hn-fbs-50）
气相：空气95%，二氧化碳5%
温度：37℃
培养：
一、贴壁细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6ml新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，第一次传代比例为1:2。
3传代步骤：将0.25%含edta胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlpbs，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间，记录zui佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
二、悬浮细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；
2.将离心好的细胞转移至t-25瓶中，并加入5-6ml新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；
3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，第一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。
细胞总数：
1~3*106
传代周期：
2-3天
传代比例：
1:2~1：3
换液频率：
2-3天
冻存液：
90%fbs+10%dmso
四、注意事项：
1 收到细胞后首先观察t-25瓶是否有损坏、漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2 瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养
3 对于贴壁细胞，若大部分细胞漂浮，置于培养箱隔夜观察，大部分漂浮细胞重新贴壁，表明细胞活力正常，继续培养，剩余漂浮的细胞可以去掉；若大部分细胞仍然不贴壁，将漂浮的细胞离心收集，用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并与本公司销售人员及时联系。
4 建议客户收到细胞后不同倍镜各拍几张细胞的照片，记录细胞状态，如细胞状态出现问题请于72h内与本公司销售联系，以便于更好的帮您解决问题，超过时间我段，本公司则默认细胞状态良好，不免费对后续细胞状态问题进行售后。
5 因细胞产品的特殊性，如客户对本公司细胞质量存有疑问，请于收到细胞后一个月内与本公司销售联系，超过时间段，本公司则默认细胞质量优良，不承担因细胞产生的任何责任。
上海慧颖生物科技有限公司
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组成：组份
数目
细胞
1 t-25瓶
细胞说明书
一份
细胞简介：生长特性：
贴壁生长，贴壁性不牢
培养条件：
培养基：90%1640 +10%fbs（推荐hakata优等胎牛血清 货号：hn-fbs-50）
气相：空气95%，二氧化碳5%
温度：37℃
培养：
一、贴壁细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6ml新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，第一次传代比例为1:2。
3传代步骤：将0.25%含edta胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlpbs，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间，记录zui佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
二、悬浮细胞
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；
2.将离心好的细胞转移至t-25瓶中，并加入5-6ml新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；
3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，第一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。
细胞总数：
1~3*106
传代周期：
2-3天
传代比例：
1:2~1：3
换液频率：
2-3天
冻存液：
90%fbs+10%dmso
四、注意事项：
1 收到细胞后首先观察t-25瓶是否有损坏、漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2 瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养
3 对于贴壁细胞，若大部分细胞漂浮，置于培养箱隔夜观察，大部分漂浮细胞重新贴壁，表明细胞活力正常，继续培养，剩余漂浮的细胞可以去掉；若大部分细胞仍然不贴壁，将漂浮的细胞离心收集，用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并与本公司销售人员及时联系。
4 建议客户收到细胞后不同倍镜各拍几张细胞的照片，记录细胞状态，如细胞状态出现问题请于72h内与本公司销售联系，以便于更好的帮您解决问题，超过时间我段，本公司则默认细胞状态良好，不免费对后续细胞状态问题进行售后。
5 因细胞产品的特殊性，如客户对本公司细胞质量存有疑问，请于收到细胞后一个月内与本公司销售联系，超过时间段，本公司则默认细胞质量优良，不承担因细胞产生的任何责任。
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