TSQ Altis三重四极杆对血浆中候选药物混合物进行灵敏的定量分析
目的：为检测和定量人血浆中目标制剂混合物开发一种灵敏、耐用和可重现的 lc-ms/ms 分析 方法
前言：在大多数制药企业中，小分子候选药物作为新化学实体或仿制药，占据了药物发现管道 的大部分比例。目标定量分析是工作流程的一个关键组成部分，其要求成功开发出 小分子药物。而这些目标定量分析必须在生物基质中完成，因此，常常带来分析挑战。 在本项研究中，我们报道了为大鼠血浆中多个药物标准品开发的灵敏、耐用、可靠和可 重现的 lc-ms/ms 分析方法。
实验：样品制备 采用乙腈（acn): 血浆 =3:1 破坏血浆，从而制备已破坏的血浆 储备液。将制备的溶液在 10,000 rpm 下离心 10 分钟。去除上 清液，并加入等体积的水，最终得到已破坏血浆的储备原液。 将已破坏血浆储备混合液中每种标准化合物浓度为 1 mg/ml 的 储备液稀释至
1 pg/ml–25,000 pg/ml 和 10 pg/ml-100,000 pg/ml。将同位 素标记的内标化合物加入到每个校正水平上，从而得到最终浓 度为 0.5ng/ml 的内标溶液。所有试剂均购自 cerilliant 公司（朗 德罗克，得克萨斯州），浓度为 1 mg/ml 的甲醇溶液。
液相色谱法：采用 thermo scientifictm vanquishtm horizon hplc 系统 进行色谱分离。所使用的色谱柱为 thermo scientifictm hypersil goldtm aq c18 极性封端 lc 色谱柱（100 × 2.1 mm，1.9 µm 粒径）。流动相 a 和 b 分别为 10 mm 甲 酸铵水溶液（采用 fisher chemicaltm optimatm 级纯水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱温为 50 ℃。总运行时间为 3.5 分钟（表 1）。
质谱分析法 采用 thermo scientifictm tsq altistm 三重四极杆质谱仪进行质 谱分析，配置 thermo scientifictm optamaxtm ng 离子源室。 表 2 和表 3 显示了实验设置中使用的质谱仪离子源和 srm 参 数。
数据分析 采用 thermo scientifictm tracefindertm 软件采集并处理数据。
结果与讨论：研究发现，采用 tsq altis ms 测得的每个候选药物的定量下限 （lloq）明显低于采用以前几代 ms 系统的测量值（表 4）。 此外，内标化合物的 %cv 值显著降低也意味着 tsq altis 质谱 的耐用性和重现性更优。300 pg/ml qc 2 的典型色谱图见图 1。 qc 线性和重现性的更多详细信息见表 5
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实验：样品制备 采用乙腈（acn): 血浆 =3:1 破坏血浆，从而制备已破坏的血浆 储备液。将制备的溶液在 10,000 rpm 下离心 10 分钟。去除上 清液，并加入等体积的水，最终得到已破坏血浆的储备原液。 将已破坏血浆储备混合液中每种标准化合物浓度为 1 mg/ml 的 储备液稀释至
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液相色谱法：采用 thermo scientifictm vanquishtm horizon hplc 系统 进行色谱分离。所使用的色谱柱为 thermo scientifictm hypersil goldtm aq c18 极性封端 lc 色谱柱（100 × 2.1 mm，1.9 µm 粒径）。流动相 a 和 b 分别为 10 mm 甲 酸铵水溶液（采用 fisher chemicaltm optimatm 级纯水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱温为 50 ℃。总运行时间为 3.5 分钟（表 1）。
质谱分析法 采用 thermo scientifictm tsq altistm 三重四极杆质谱仪进行质 谱分析，配置 thermo scientifictm optamaxtm ng 离子源室。 表 2 和表 3 显示了实验设置中使用的质谱仪离子源和 srm 参 数。
数据分析 采用 thermo scientifictm tracefindertm 软件采集并处理数据。
结果与讨论：研究发现，采用 tsq altis ms 测得的每个候选药物的定量下限 （lloq）明显低于采用以前几代 ms 系统的测量值（表 4）。 此外，内标化合物的 %cv 值显著降低也意味着 tsq altis 质谱 的耐用性和重现性更优。300 pg/ml qc 2 的典型色谱图见图 1。 qc 线性和重现性的更多详细信息见表 5
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